VSEBINA ARTEMIZININA V ARTEMISIA ANNUA L PRIDOBLJENIH RAZLIČNIH METOD Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, SV Zhshzhitzhapova, LD Državna univerza Padnaeed Buryat, st. Smolin, 24a, Ulan-Ude (Rusija) Tomska državna univerza, Lenina Ave., Tomsk (Rusija) Baikalski inštitut za upravljanje z naravo, Sibirska podružnica Ruske akademije znanosti, ul. Sakhyanova, 8, Ulan-Ude (Rusija)
Obravnavana so vprašanja o izolaciji artemisinina iz Artemisia annua L. in kvantitativni določitvi z uporabo metode HPLC-MS. Artemizinin smo izolirali z različnimi metodami ekstrakcije: maceracijo, ultrazvok in ekstrakcijo s CO2. Sestavina sestavin ekstraktov CO2 in heksana je bila raziskana z GC-MS.
Uvod
Artemisinin (1) je peroksid seskviterpen [1], ki je zelo učinkovito antimalarično zdravilo in predhodnik močnejših spojin, kot so artemeter, artesunat in nekateri drugi. Pomen artemisinina in njegovih derivatov temelji na zelo hitrem delovanju te vrste spojine proti glavnemu patogenu Plazmodium falciparum, ki prav tako povzroča možganske bolezni. Kemična in biokemična sinteza artemizinina se je izkazala za zelo drago in je zato trenutno glavni vir proizvodnje artemizina [2].
Malarijo povzroča mikroorganizem - Plasmodium malaria. V človeškem telesu so 4 vrste takih plazmodija, parazitske: Plazmodium vivax, P. ovale, P. malariae in P. falciparum. Sredi 20. stoletja je bilo zaradi razširjene uporabe kinina in njegovih derivatov mogoče znatno zmanjšati število bolnikov z malarijo. Vendar pa od 60-ih. v preteklem stoletju se je malarija ponovno spomnila nase. Razlog za to je dejstvo, da so se na Tajskem in v Južni Ameriki pojavile in razširile malarija Plasmodium (P. falciparum), ki je odporna na kinin, klorokin, meflokin in druge droge na osnovi kinolina [3, 4]. Problem iskanja novih učinkovitih antimalaričnih zdravil, med katerimi je bil predlagan artemisinin, je postal aktualen. Ta edinstvena spojina je bila odkrita na Kitajskem (kitajsko ime je qinghaosu). Dela so se začela leta 1967 in so se imenovala »Program 523« [5]. Izolirana je iz pelina letne Atemisia annua L., ki se razprostira na ozemlju nekdanje Sovjetske zveze in zajema območja Altaja, Transbaikalije, Amurske regije, Kazahstana, Kirgizije, Uzbekistana in Turkmenistana. Pelin je široko zastopan na Kitajskem in v drugih državah [6]. Skupna količina artemizinina, izoliranega iz različnih delov A. annua, je približno 0,01 in 1,4% suhe listne mase [2].
Artemisia annua L. je glavna surovina za proizvodnjo artemizina. Svetovna zdravstvena organizacija je leta 2001 priporočila uporabo artemisinina v terapiji prve linije za nadzor malarije, kar je privedlo do povečanja površine pod enoletnim pelinom. Večinoma se pelina letno prideluje v vzhodni Aziji, predvsem na Kitajskem in v Vietnamu (70% površine iz svetovnih zalog), ki je bila nedavno uvedena v kulturo v vzhodni in južni Afriki (20% površine svetovnih zalog), kar zagotavlja četrtino svetovnih zdravstvenih potreb. [7].
Poleg artemisinina se A. annua ceni zaradi svojega eteričnega olja, ki ima značilno sladko, travnato aromo in se uporablja v parfumerijskih in kozmetičnih izdelkih. Poleg tega ima olje antibakterijske lastnosti in se lahko uporablja za zdravljenje kožnih bolezni. Poleg seskviterpenskih laktonov, ki imajo glavno terapevtsko vrednost, eterična olja te rastline vsebujejo veliko količino sestavin, ki imajo vrednost, kot so 1,8-cineolej, artemizijski alkohol in keton, borneol in drugi. je analiziral tudi fiziološki učinek lipofilnih ekstraktov na kožo [2].
V povezavi z bogato in raznoliko sestavo biološko aktivnih snovi, ki jih vsebuje Artemisia annua, je zelo zanimivo iskanje novih področij rasti letnega pelina. V Republiki Buryatia raste 46 vrst polinuma [8], vključno z Artemisia annua L. Vsebina artemisinina na Poljskem, enoletna, ki raste v Burjatji, še ni bila raziskana. Zato je bil namen tega dela kvantitativna določitev artemizinina v ekstraktih, pridobljenih z različnimi metodami ekstrakcije.
Eksperimentalni del
Surovina za študijo je bila izbrana nadzemni del poljske letne Artemisia annua L., zbrane v prvi dekadi avgusta 2010, v fazi cvetenja.
Izolacijo artemizinina in drugih biološko aktivnih snovi (eteričnega olja) smo izvajali z različnimi metodami ekstrakcije: maceracijo, ultrazvočno ekstrakcijo in ekstrakcijo s subkritičnim CO2. Ekstrakcija je bila izvedena na laboratorijskih napravah. Kot ekstrakte smo uporabili heksan, etil acetat, etanol in CO2. Podatki in ekstrakcijski parametri so prikazani v tabeli 1. Ekstrakti iz oborine smo ločili s centrifugiranjem v centrifugi OP-8UHL4.2 pri 5000 vrt / min in nato filtrirali skozi sistem za filtriranje vzorca.
Kvantifikacijo artemisinina smo določili s HPLC-MS z uporabo visoko zmogljivega tekočinskega kromatografa Finnigan Surveyor, opremljenega z avtomatskim vzorčevalnikom Plus in črpalko LC Pump Plus z detektorjem LCn Advantage MAX (ionska past), ionizacijska metoda - elektrosprej. Stolpec "Hypersyl Gold" 150 × 4 mm, napolnjen s silikagelnim sorbentom s C18 cepljenimi fazami (velikost delcev 5 μm), (proizvajalec Thermo electronic corporation, USA). Elucijo smo izvedli v izokratnem načinu (50% (A): 50% (B)), sestava začetnega pufra (A) je bila vodna raztopina mravljinčne kisline, (pH = 3) + 2 ml nasičene raztopine amonijevega acetata, elucijski pufer (B) - 100% acetonitrila. Volumski pretok eluenta je 0,5 ml / min, volumen vbrizganega vzorca (avtosampler) je 25 μl. Ionska registracija je bila izvedena v načinu spremljanja pozitivno nabitih ionov (izbrano ionsko spremljanje, SIM), z molekulsko maso 300 (zaradi dodajanja amonijevega iona NH4 molekuli artemizinina) s širino okna (299-301) m / z. Kvantitativno določanje smo izvedli z interno standardno metodo z uporabo standardnega vzorca iz Sigme.
Metode in parametri ekstrakcije
Št. P / p Metoda ekstrakcije Ekstrakant Čas ekstrakcije / parametri ekstrakcije Vsebnost Artemisinina v%, v smislu a.s.s.
1 Maceracija etanola 24 h / razmerje surovin: topila (1: 5) 0,040 ± 0,002
2 Maceracijski etanol 48 h / surovine: razmerje topil (1: 5) 0,038 ± 0,002
3 Maceracija heksana 24 h / razmerje vzorca: topilo (1: 5) 0,039 ± 0,002
4 Ultrazvočno ekstrakcijo etanola 15 min / razmerje surovin: topilo (1: 5), sondirna frekvenca 50 Hz, T = 25 ° C 0,039 ± 0,002
5 Ultrazvočna ekstrakcija etil acetat 15 min / surovine: razmerje topil (1: 5), frekvenca sondiranja 50 Hz, T = 25 ° C 0,022 ± 0,001
6 CO2-ekstrakcija so2 24 h / pretok 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6.0-6.2 MPa 0.054 ± 0.003
Poleg tega so hlapne komponente ekstraktov CO2 in heksana raziskali s kromatografsko-masno spektrometrijo na plinskem kromatografu Agilent Packard HP 6890 s kvadrupolnim detektorjem MSD 5973N. Uporabili smo 30-metrski kremenov stolpec TR-5 ms z notranjim premerom d = 0,25 mm, debelino filma 0,25 μm. Kromatografsko ločevanje smo opravili, kot je opisano v [9]. Sestavine ekstraktov smo kvalitativno določili s primerjanjem skupnih masnih spektrov s podatki kromatografskih podatkov masne spektrometrije hlapnih snovi rastlinskega izvora A. Tkachev, knjižnice NIST 08 in Wiley 275. Rezultati analize so predstavljeni v tabeli 2.
Glavne sestavine ekstraktov CO2 in heksana
Relativna površina vrha Povezave Relativna površina vrha
Spojine ekstrakta heksana z ekstraktom CO2
Ekstrakt CO2 Ekstrakt heksana
Dolgoročni ogljikovodiki z monoterpenoidi
Tricicilen 140181 - Tricosane 103969 52288
a-pinene 1155320 - Tricozen-1 1956324 -
Camphene 2021028 - n-Pentakozan 534763 110485
R-pinen 371548 1683858 645634 - - -
n-heptakosan 279800 132358
3-caren
Ciklični ogljikovodiki
Limonen
Pentacyclo 576196 -
R-phellandren 587143 - [7.5.0.0 (2.8].0 (5.14) 0.
1,8-cineol 133599 - (7.11)] tetradekan
Artemisia keton 1413437 - 1,8-dimetilfenantren 3765681 1080289
Borneol 170158 707945 - - Flyuoren 3507465 319501
Bornil acetat
Diterpenoidi
Seskviterpenoidi
Metil 3,5-bis (etilamino) benzoat 627581 283913
Cariofillen 370714 214560 - -
Karyofillen oksid
Germacren D 214913 -
R-Selinen 3053333 328535
a-cadinol 149485 -
Razprava o rezultatih
Kot je razvidno iz podatkov, predstavljenih v tabeli 1, je bil najnižji donos artemizinina (0.022%) z ultrazvočno ekstrakcijo z etil acetatom. Vsebnost artemizinina v ekstraktih, izoliranih z ultrazvočno ekstrakcijo in maceracijo z različnimi topili (heksan, etilni alkohol), se glede A. p. Pri stalni uporabi etilnega alkoholnega pelina 24 ur in 48 ur je vsebnost artemizinina v pridobljenih ekstraktih približno enaka 0,040 in 0,038%. Najvišji izkoristek artemisinina (0,054%) je bil dosežen pri predkritičnem ekstrakciji CO2. Za primerjavo smo predstavili nekaj podatkov o vsebnosti artemizinina v enoletnem pelinu, ki raste na različnih območjih. Artemisia annua L., ki raste v različnih delih Kitajske, vsebuje od 0,01 do 0,22% artemisinina. Nekateri hibridi letnega pelina, ki se gojijo na Kitajskem in v Vietnamu, vsebujejo 1,0-1,5% artemizinina [10]. Vsebnost artemizinina v A. annua, ki raste na ozemlju nekdanje ZSSR, je naslednja (vrednosti so podane glede na suhe suhe snovi): gruzijski SSR (0,005%), Kirgiška SSR (0,025%), Moldavski SSR (0,01-0,02%), Krasnodar Territory (0,04%), Ukrajinska SSR (0,005-0,05%), Turkmenistan (0,05% v smislu a.s.c.), Kazahstan (0,01-0,05% glede na A.S.S.) [11].
Pri preučevanju sestave ekstraktov letnega pelina, pridobljenega s CO2-ekstrakcijo in maceracijo, ko je bil kot izvleček uporabljen heksan, je kromatografija-masna spektrometrija pokazala pomembne razlike v sestavi teh ekstraktov. Monoterpenoidi, seskviterpenoidi, dolgo verižni ogljikovodiki, ciklični ogljikovodiki in diterpenoidi so odkriti z metodo masne spektrometrije.
Monoterpenoide najdemo samo v ekstraktu CO2. Glavne sestavine ekstrakta CO2 so a-pinen, 3-caren, keton artemisije, (3-selenen, tricozen-1, 1,8-dimetilfenantren in fluoren.
V heksanskem ekstraktu pelina z letno plinsko kromatografijo - masno spektrometrijo smo identificirali predvsem dolgo verižne ogljikovodike in ciklične ogljikovodike, 3-selenen pa smo odkrili iz seskviterpenoidov.
Poleg artemizinina, ki ima primarno zdravilno vrednost, vsebuje eterično olje veliko število bioloških sestavin, kot so keton artemizije, 1,8-cineol, borneol itd.
Sklepi
1. Vsebnost artemizinina v različnih ekstraktih A. annua (zračni del, faza cvetenja), ki raste na ozemlju Republike Burjatije, je bila določena s HPLC-MS.
2. Najvišja vsebnost artemizinina najdemo v ekstraktu CO2 (0,054% v smislu a.s.c.), t
3. S pomočjo kromatografske masne spektrometrije smo proučevali sestavo eteričnega olja, pridobljenega z različnimi metodami ekstrakcije.
Artemisia annua L.
Opis taksona
Ruska imena
Sistematika
Slike
Rastline na zemljevidu
Botanični opis
Artemisia annua L. Sp. pl. (1753) 847; Bess. v Nouv. Mem. Soc. Nat. Mosc. III, 81; Dc. Prodr. VI, 119; Ldb. Fl. Ross. II, 592; Boiss Fl. ali. III, 371; Maxim v Bull. Acad. Sc. Petersb. Viii, 528; Hook Fl. Br. Ind. III, 323; Com v fl. Manch. III, 659; Nakai, Fl. Korejščina. II, 30; Fedch. Seznam var. Turk IV, 200; Rydb. North Am. Fl. 34, 3. del, 259; Pampan v Nuovu. Giorn. Bot. Ital. n.s. XXXIV, 637; Hall in Clem. Artem (1923) 102; Com in alice. Opt. var. Daljni vzhod cr. II, 1036; Krasheninn. v fl. jugovzhodno Europ Del ZSSR, VI, 357; Grossg. Fl. Kavk. IV, 138; Krasheninn. in Wings. Fl. Zap. Sib. XI, 2816; Pole v Mayevsky, FL. 586. - A. chamomila Winkl. v Tr. Petersburg bot Vrt, X, 87; Fedch. cit. cit. - Ic. Stirp. rar. t. 193, f. 23; Gmel. Fl. sib. II. 25. - Izid: GRF № 3152. - Enoletni pelin.
Letno Rastlina je dišeča, zelena, gola ali z raztresenimi, majhnimi, sosednjimi dlakami, ravnimi, rebrastimi, rjavkasto-vijolično-rjavkastimi stebri višine 30–100 cm. listi so pikčasti-fossa-ferruginous, spodnji petiolate, 3-5 cm dolgo. in 2-4 cm široka., ovalna, trikrat pikasta, segmenti zadnjega reda podolgovati, kratek; celi ali z 1-2 zobmi, dolgi 1-2 mm. in 0,5 mm širine; srednji in stebelni listi so dvojno lističi, zgornje sede, manjši in manj kompleksni, zgornji listi so preprosti ali z majhnim številom stranskih lobul. Košare so okrogle, široke 2–2,5 mm, številne, zavrnjene ali povešene, na kratkih nogah, skupaj na kratkih vejah, v b. m. dolga, piramidna socvetja; ovoj je gladka, zunanji lističi so linearno podolgovati, zeleni, notranji ovalni ali skoraj okrogli, s široko robnim robom okrog roba; posoda konveksna, gola; mejne rožnate rožice, 10–20 v številu, filamentne krošnje, pikaste žlezde, ozko linearne, lisice stigme, nejasne, izpostavljene iz cevi; cvetovi na plošči so biseksualni, 12–30 v številu, cevasti z ozko kapo, goli; prašniki ozko linearni, zgornji privesek podolgovat, akutno nagnjen, bazalni krili zelo kratki, koničasti; kolona je krajša od prašnikov, stigma stigme je linearna, ravna, rahlo odmaknjena, na vrhu je ciliata; krošnje 0,8–0,6 mm dolge., podolgovate, ovalne, ploščate, na vrhu z majhno zaokroženo ploščadjo, komajda obrobljene ob robu. Barva VIII - IX.
V hudih mestih v bližini stanovanj, vrtov, vrtov. - Evropa. h.: Zgornji Dnjestr., Zgornji Dneper., Volž. Don., Volga., Spodnja Don., Črna., Bess., Krim; Kavkaz: Zap.- in vzhod. Trans., Tal., Sre. Azija: Aral-Casp., Balkh., J.-Tarb., Tien-Shan., Syr-Dar., Pam. - Al., Amu-Dar., Horn. Turk Skupaj var.: ur Heb., Srediz., Balk. -Maloaz., Arm.-Kurd., Iran, J.-Kashg., Kit., Jap., Mongolia, North. Amerika (tujec).
Tip pogleda so risbe Amana in Gmelina.
Khoz. vrednost Donos eteričnega olja je 0,1–0,64% (po Goryajevu). Po Joshikazu Imade (1937) sta cineol in snov C10H6O v olju; to snov so podrobno proučevali Ashania in Joshitomi (1917); skupaj z artemacijaketonom je bil v olju najden njegov izomer, izoartemiziaceton. Ta keton je bil sposoben izolirati iz matične lužnice, ki je ostala pri pripravi semikarbosona artemcijaacetona. Seisi Takagi (1928), ki je nadaljeval študijo japonskih A. annua, na 4 sestavine, znane v nafti, je dodal še dve novi: kadinen in kariofilen. Na podlagi raziskav Rutovskega in Vinogradova (1929) je olje sestavljeno iz α-pinena, cineola, camphena, artemisiaketona in izoartemiziseketona, majhne količine borneola, ocetne in maslene kisline, kimuno aldehida (verjetno semikarbosona) in fenola (verjetno eugenola). V podzemnih delih so našli majhno količino alkaloidov (Lazurievsky, Sadykov, 1939; Massagetov, 1947). Glede na ugotovitve na terenu (Yunatov, 1954), v zelenem stanju ne jedo živina. Prisotnost alkaloidov potrjuje M.I. Goryaeva, G.K. Kruglykhina, E.I. Satdarova (1959).
Izvleček in disertacija o medicini (14.04.02) na temo: Farmakognostna študija Artemisia annua L. in Artemisia sieversiana Willd. flore Burjatije
Izvleček disertacije iz medicine na temo Farmakognostna študija Artemisia annua L. in Artemisia sieversiana Willd. flore Burjatije
Kot rokopis
Soktoeva Tuyana Erdemovna
FARMAKOGNOSTIČNE RAZISKAVE ARTEMISIA ANNUA L. IN ARTEMISIA SIEVERSIANA WILLD. FLYORS OF BURYATIA
04/14/02 - farmacevtska kemija, farmakognozija
Izvleček doktorske disertacije
Disertacijsko delo je bilo izvedeno v Zvezni državni proračunski izobraževalni ustanovi višjega strokovnega izobraževanja „Državna univerza Buryat“ Ministrstva za izobraževanje in znanost Ruske federacije in ustanovitev Ruske akademije znanosti pri Baikalskem inštitutu za okoljsko upravljanje, Sibirski oddelek Ruske akademije znanosti.
Nadzornik: doktor kemijskih znanosti, profesor
Radnaeva Larisa Dorzhievna
Uradni nasprotniki: doktor bioloških znanosti, profesor
Antsupova Tatyana Petrovna
Kandidat za farmacevtske znanosti Mongolov Hanhai Purbuevich
Vodilna organizacija: država Perm
Ministrstva za zdravje in socialni razvoj Ruske federacije
Obramba bo potekala 23. decembra 2011 ob 10: 00h na seji sveta mag. DM 003.028.02 na Inštitutu za splošno in eksperimentalno biologijo SB RAS na naslovu: 670047 Ulan-Ude, ul.
Disertacija je dostopna v Centralni znanstveni knjižnici Buryatskega znanstvenega centra SB RAS.
Izvleček objavljen 22. novembra 2011.
Znanstveni sekretar sveta za disertacijo kandidat za biološke vede
SPLOŠNI OPIS DELA Ustreznost teme. Rastline rodu Artemisia (pelin) so obetavni viri biološko aktivnih snovi, kot so pehtranov pelin Artemisia dracunculus L., pelin Artemisia absinthium L., pelin Artemisia vulgaris L., ki se pogosto uporablja v ljudski, tradicionalni medicini in živilski industriji. Letni pelin Artemisia annua L. je bil uspešno uveden v kulturo v številnih državah, leta 2001 pa ga je Svetovna zdravstvena organizacija priporočila kot glavni vir artemisinina, prvega zdravljenja malarije. Danes države, ki proizvajajo artemizinin, zagotavljajo približno četrtino svetovnih zdravstvenih potreb (Tolstikova, 2010; Xiao Wang, 2011). Iz enoletne starosti je bilo izoliranih 137 biološko aktivnih spojin, med njimi 40 seskviterpenov, 10 triterpenov, 7 kumarinov, 46 flavonoidov, ki lahko služijo kot osnova za razvoj zdravil (Bhakuni, 2001). V osemdesetih letih 20. stoletja je skupina znanstvenikov (Schroeter, 1989) v CISA (Moskva) poskušala gojiti divje rastoči del enoletne flore ZSSR. Danes se večja dela na uvodu prvega letnika izvajajo na Tomski državni univerzi. V Buryatia n.
Skupaj z letnim parazitom v Burjatski, Sivers pelin Artemisia sieversiana Willd, je razširjena, ki je tudi obetavna vrsta. Trava Seabera vsebuje flavonoide, eterično olje, kumarine (Tkachev, 2002; Shatar, 1998; Hanina, 1999; Suleimenov, 2009). Eterično olje Sivers je zanimivo kot vir chamazulena, netoksične spojine z protivnetnimi, baktericidnimi, regenerativnimi učinki (Berezovskaja, 1991; Khanina, 1992).
Doslej podrobna kemijska študija o pepelih in pelinah Siversa letne flore Buryatije ni bila izvedena kot obetavni vir biološko aktivnih snovi, zato je njihova študija nujna naloga.
Cilj: Farmakognostna študija Siversovega pelina Artemisia sieversiana Willd. in pelin letno Artemisia annua L. kot dragocen vir biološko aktivnih snovi.
Za dosego tega cilja je potrebno rešiti naslednje naloge:
1. Opredeliti anatomske in diagnostične znake nadzemnega dela Siversa in P. enoletnega, da bi vzpostavili kazalce trženja
surovine, oceni rezerve in možnost spravila letno in p. Siversa na ozemlju Republike Burjatije;
2. Preučiti kemično sestavo glavnih skupin biološko aktivnih snovi teh rastlin in določiti njihovo količinsko vsebino, določiti lokalizacijo eteričnih olj in artemizinina v posameznih delih rastlin, preučiti dinamiko njihovega kopičenja v razvojnih fazah in določiti optimalne pogoje zbiranja;
3. Razviti metodo za kvantitativno določanje artemizinina v nadzemnem delu enoletne starosti;
4. Določiti kazalnike kakovosti in standarde za vsebnost osnovnih biološko aktivnih snovi, razviti regulativno dokumentacijo za zdravilne surovine - travno pelino Sivers in travo enoletnega pelina.
Znanstvena novost. Ugotovljene so bile glavne diagnostične značilnosti trave Sivers in P. godišnje, razviti so bili numerični kazalniki, potrebni za standardizacijo surovin.
Izdelana je bila študija kemijske sestave trave Sivers in trave enoletne trave. Določili smo vsebnost eteričnih olj, flavonoidov, maščobnih kislin, makro- in mikroelementov. Flavonoidi - luteolin-7-glukozid, rutin, quercetin in chryoeriol so bili odkriti s HPLC-MS metodo v teh rastlinah. Glavne maščobne kisline v preučevanih vrstah pelina so palmitinska, linolna, linolenska, 10% oktadekenska kislina pa se nahaja tudi v pomembnem pelinu.
Določeni so bili pogoji za ekstrakcijo artemisinina (vrsta ekstrakta, ekstrakcijska metoda, čas ekstrakcije) iz letne zelišča in ugotovljeno je bilo, da se maksimalna ekstrakcija artemizinina doseže z ultrazvočno in subkritično ekstrakcijo s CO2. S HPLC-MS je bilo ugotovljeno, da je največja količina artemisinina v enoletni starosti vključena v cvetoče obdobje v socvetjih.
Študija dinamike kopičenja eteričnega olja, odvisno od faze razvoja in dela obrata. Največja količina eteričnega olja kamazulena p. Siversa se kopiči v fazah brstenja in cvetenja v socvetjih.
Vzpostavljeni kazalniki kakovosti BAS so vključeni v regulativne dokumente.
Praktični pomen. Rezerve in možni letni obseg nabave naselja Sivers in poravnave enoletne na ozemlju Republike Burjatije (poselitev Siversa - od 0,1 do 73,7 tone na leto in poravnava eno leto - od 1,2 do 122,3 tone na leto).
Razvita je bila tehnika za kvantitativno določanje artemizinina v p. Trava z letno HPLC-MS metodo. Pogoji za pripravo vzorcev surovin za analizo za kvantitativno določanje artemizinina so znanstveno utemeljeni.
Izvedena je bila standardizacija surovin, razvili so se projekti FS - „Sivers Wormwood Herbal“ in „Wormwood One-Grass“.
Stopnja izvajanja. Metodo pridobivanja podatkov o eteričnih oljih in mikroskopskih analizah smo preizkusili in vpeljali v vzgojno-izobraževalni proces Oddelka za farmacijo pri Zveznem državnem proračunskem izobraževalnem zavodu za visoko strokovno izobraževanje “Buryat State University” (Zakon o izvajanju št. 1 z dne 6. septembra 2011). Projekti FS na travi peščenega sivra in enoletnega pelina so pripravljeni na obravnavo.
Za obrambo so izločeni:
• rezultate študije anatomske strukture, staležev, meril avtentičnosti Sivra in P., ki rastejo v Burjatti;
• rezultati kemijske študije biološko aktivnih snovi in njihove sezonske dinamike kopičenja;
• rezultate študij o standardizaciji nadzemnega dela Siversa in str.
Potrditev dela. Glavne določbe diplomskega dela so bile predstavljene in obravnavane na: znanstveno-praktični konferenci z mednarodno udeležbo »Razvoj tradicionalne medicine v Rusiji: izkušnje, raziskave, perspektive« (Ulan-Ude, 2010); 7. zimski simpozij o kemometriji "Sodobne metode analize podatkov" (Saint-Petersburg, 2010); mednarodna znanstvena konferenca ob 15. obletnici Buryatske državne univerze "Aktualne študije o Bajkalni Aziji" (Ulan-Ude, 2010); V mednarodna znanstveno-praktična konferenca "Prednostne naloge in značilnosti razvoja Bajkalske regije" (Ulan-Ude, 2011); X mednarodna znanstveno-praktična konferenca "Problemi botanike Južne Sibirije in Mongolije" (Barnaul, 2011); IV. All-Russian Conference "Novi napredek v kemiji in kemijski tehnologiji rastlinskih materialov" (Barnaul, 2009); XVI mednarodna konferenca študentov, podiplomcev in mladih znanstvenikov "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV Mednarodna študentska ekološka konferenca "Ekologija Rusije in sosednjih ozemelj" (Novosibirsk, 2010); II. Vse ruska znanstveno-praktična konferenca študentov, podiplomskih študentov in mladih znanstvenikov "Tehnologije in oprema kemijske, biotehnološke in prehrambene industrije" (Biysk, 2009); Vse ruska znanstveno-praktična konferenca "Vegetacija
Bajkalno in sosednja ozemlja “(Ulan-Ude, 2011); V Šolski seminar mladih znanstvenikov iz Rusije »Problemi trajnostnega razvoja regije« (Ulan-Ude, 2009); regionalna mladinska znanstveno-praktična konferenca z mednarodno udeležbo "Okolju prijazne tehnologije in materiali, ki varčujejo z viri" (Ulan-Ude, 2010).
Delo je potekalo v okviru raziskovalnih projektov: RFBR: 08-04-90202-Mong_a "Študija biogenetskih vzorcev biosinteze biološko aktivnih spojin endemičnih rastlin Srednje Azije" (2008-2009), 08-04-98037-r_sibir_a "Kemijska sestava rastlin kot indikator stanje ekosistemov v Bajkalski regiji "(2008-20 Yugg,); interdisciplinarni integracijski projekt št. 93 "Razvoj raziskav na področju medicinske kemije in farmakologije kot znanstvene podlage za razvoj domačih zdravil"; skupni projekt z Akademijo znanosti Mongolije "Pridobivanje novih lipo-in nanosomalnih oblik zdravil z uporabo naravnih surovin"; RFBR: 10-03-16001-mob_ros "Mobilnost mladih znanstvenikov" (2010), 11-03-90705-mob_st znanstveno delo (usposabljanje) mladih ruskih znanstvenikov v vodilnih znanstvenih organizacijah Ruske federacije 2011 (2011).
Publikacije. Po rezultatih je bilo objavljenih 17 znanstvenih člankov, od tega 3 v periodičnih publikacijah, ki jih priporoča Visoka atestna komisija Ministrstva za obrambo in znanost Ruske federacije.
Obseg in struktura diplomskega dela. Diplomsko delo je predstavljeno na 172 straneh pisanega besedila in je sestavljeno iz uvoda, pregleda literature (1 poglavje), eksperimentalnega dela (4 poglavja), splošnih zaključkov, seznama referenc in aplikacij. Delo je ponazorjeno s 37 tabelami in 61 slikami. Bibliografski indeks obsega 139 virov, od tega 42 tujih.
V uvodu je utemeljena relevantnost teme, oblikovan namen in cilji raziskave, predstavljena znanstvena novost in praktični pomen dela.
V prvem poglavju (pregled literature) so predstavljeni podatki o kemijski sestavi, spektru farmakološke aktivnosti, uporabi rodu Artemisia L. v tradicionalni in sodobni medicinski praksi.
Drugo poglavje (materiali in metode) predstavlja podatke o predmetih študija, uporabljenih metodah, napravah in reagentih, drugih metodoloških informacijah.
Tretje in četrto poglavje podajata podatke o študiju anatomskih in diagnostičnih znakov Severs S in starosti enega leta. Po metodi
UV spektrofotometrija je določila skupno vsebnost flavonoidov in taninov v predmetih študije. S pomočjo GC-MS smo raziskali kakovostno in količinsko sestavo eteričnega olja in maščobnih kislin pelina. Metoda HPLC-MS je določila kvalitativno in kvantitativno vsebnost flavonoidov. Elementna sestava rastlin je bila določena z metodo AAS. Razvila in predlagala se je tehnika za določanje vsebnosti artemisinina. s HPLC-MS. Poleg tega smo raziskali kemijske sestave eteričnih olj petih vrst polinij, ki se najpogosteje pojavljajo na ozemlju Burjatske in Mongolije - Gmelin Artemisia gmelinii Web wormwood. et Stechm., pelin, siva Artemisia glauca Pall, ex Wild., pelin, Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess., Sievers pelin Artemisia sieversiana Willd. in Artemisia annua L.
V petem poglavju so podani podatki o standardizaciji rastline Sivers in P. enoletne, ki so predlagani kot obetavni viri chamazulena oziroma artemisinina.
Glavna vsebina dela
Predmeti in metode raziskovanja. Predmet raziskave so bili vzorci trave iz Siversa in letne vasi, zbrane v različnih okrožjih Republike Burjatije (Ivolginski, Pribaikalski, Selenginski, Tunkinski, Zakamensky, Kurumkanski) Irkutske regije (otok Olkhon) in Mongolije (Selenginski Aimak) v obdobju 2008 do leta 2011
Mikroskopska analiza je bila izvedena v skladu s členom "Tehnika mikroskopske analize" (GF XI, izdaja 2) na Mikmed mikroskopih (Lomo, Rusija) z okularjem 10x; leče 4x, 10x, 40x in MS-300 (TFXS), komplet fluorescentnih sistemov (Micros, Avstrija) z okularjem 10x; leče 4x, 10x, 40x. Donos surovin je bil določen z metodo obračunskih mest.
Ekstrakcija eteričnega olja je bila izvedena z hidrodistilacijo, ekstrakti so bili pridobljeni z ultrazvočno ekstrakcijo, ekstrakcijo s CO2 in maceracijo.
Proučevanje kvalitativne in kvantitativne sestave teh objektov je potekalo po naslednjih metodah: GC-MS, HPLC-MS, TLC, BC, UV spektrofotometrija in AAS. Kromato-masno spektrometrično analizo smo izvedli na plinskem kromatografu Agilent 6890 s kvadrupolnim masnim spektrometrom HP MSD 5973N (Agilent Technologies, ZDA; kolone: HP-5ms, g = 0,25 mm, debelina filma 0,25 μm (kopolimer - 5%, difenil) - 95% dimetilsiloksana) in DBWax z notranjim premerom 0,25 μm, nosilnim plinom - helijem, g) pretokom 1–1,5 ml / min; HPLC-MS analizo smo izvedli na tekočinskih kromatografih visoke ločljivosti Finnigan Surveyor (Thermo Scientific, ZDA) in Agilent 1200 (Agilent Technologies,
ZDA) z masno selektivnim detektorjem "LCQ Advantage MAX" ("ionska past") blagovne znamke "Finnigan" (Thermo Scientific, ZDA) in s tandemskim masnim spektrometričnim detektorjem ("ionska past") 6330 (Agilent Technologies, ZDA), metoda ionizacijski elektrosprej; pogoji: Hypersyl Gold Cl8, 5 mikronov, 150x4 mm stebri (Thermo electronic corporation, ZDA) in Zorbax Eclipse C18, 5 mikronov, 4,6 * 150 mm (Agilent Technologies, ZDA), hitrost pretoka eluenta 0,5 ml / min. TLC analizo smo izvedli na Sorbfil PTSH-P-A-UV ploščah (Imid Ltd, Rusija); BC analiza je bila izvedena na papirju FN 6 (Filtrak, Nemčija); Absorpcijski spektri so bili zabeleženi na spektrometru StellarNet Green Waiv (StellarNet Inc, ZDA), analiza AAC je bila izvedena na spektrofotometru SOLAAR MB (Thermo science, ZDA) in modelu Varian AA240 (Varian, Rusija).
Statistično obdelavo eksperimentalnih podatkov smo izvedli z metodo variacijsko-statistične analize. Del podatkov je obdelal CIM (programski paket Sirius različica 6.0, sistemi za prepoznavanje vzorcev, a / s, Norveška).
Farmakognostične značilnosti zelišča P. Sivers in P. poletja. Naslednji kazalniki kakovosti zdravilnih surovin. Siversova pelinova trava. Cele surovine. Trdni ali delno listnati vrhovi cvetočih stebel, dolgi največ 45 cm, ki ne vsebujejo grobih delov stebla. Steblo dlakave, ravne, rebraste in razvejane. Radikalni in srednji listi so pecljasti, široko trikotni, trikrat pentanasti, podolgovate ploske rezine, 1,4 - 2,5 cm dolge, 0,1 - 0,5 cm široke. Košare polkrogle, 0,4 - 0,6 cm v premeru, široke mečkasto socvetje. Edge rožnate rože (jih je približno 18). Cvetovi biseksualni, številni, z lijakasto vencem.
Trava polen letno. Cele surovine. Trdni ali delno listnati vrhovi cvetočih stebel, dolgi največ 50 cm, ki ne vsebujejo grobih delov stebla. Steblo je gola, ravna, brazdasta, na začetku rastne sezone zelena, na koncu je temno vijolična. List spodnjega in srednjega listnega stebla je jajčast ali ovalen, dolg 1,5–7,0 cm na peclju, dolžine eliptične dolžine, brez kril, trikrat prekomerno izražen v široke segmente, segmente in segmente, dolžine 0,5 do 0,8 cm, ne široke. več kot 0,2 cm košare s premerom približno 0,2 cm v panikulatnih socvetjih.
Pri anatomski študiji trave P. Sivers in P. enoletno smo ugotovili številne anatomske in diagnostične lastnosti. Struktura listov pelina je prikazana v tabeli 1. Pecelj Siversovega pelina je grob, podolgovate celice povrhnjice.
Obstajajo žleze z eteričnimi olji, dlake v obliki črke T in zaobljene želodčne celice. Steblo ima obliko nosilca. V rebrih so področja vitke. Za kolanteralne žarke, razporejene v krog, je značilna močno razvita sclerenchyma. Dobro označena endoderma, sestavljena iz velikih, tankostenskih celic okrogle oblike, tesno sosednjih.
Značilnosti anatomske strukture listov p. Sivers in str.
Polovnica povrhnjice pelin Sivers letno
zgornja ravna stena
spodnja stena navitja je nizka
tip ustigicheskega aparata zgornji anomocitik
nižja anomocita, puči bolj kot na zgornji strani lista
ovalne oblike z lentilnimi stomatalnimi celicami
Značilnosti dlakasto dlakavih dlak v obliki črke T, sestavljenih iz dvo-, štiri-celičnih nog in večceličnih dlačic z bičmi, obstajata dve vrsti dlak - zvezdasta in T-oblika z večcelično nogo
Strukture, ki vsebujejo terpenoid, so večcelične, velike žleze eteričnih olj. shizogene posode in nespecializirane parenhimske celice
na mestu enoletne, žlebljene, skoraj golo steblo, podolgovate celice povrhnjice. V enoletnem peclju, kakor tudi v steblu s. Sivers, ki ima pučkovni tip strukture, so žleze eteričnih olj, redko dlake in ovalne stomatalne celice; V obeh vrstah pelina so epidermalne celice cvetnega cvetnega traku tanko stene, podolgovate s koničastimi konci, za katere je značilno veliko število žlez eteričnih olj in odsotnost dlak.
Za več serij surovin so bili določeni kazalci prodajanja: t
Siversova pelinova trava. Vlažnost (ne več kot 7%), skupni pepel (ne več kot 11%), pepel, netopen v 10% klorovodikovi kislini (ne več kot 2%), ekstraktivne snovi (ne manj kot 33%), listi rjavi in črni (ne več kot 5%) t ), organska nečistoča (ne več kot 2%), mineralna nečistota (ne več kot 0,5%).
Trava polen letno. Vlažnost ne več kot 7%, skupni pepel (ne več kot 9%), pepel, netopen v 10% klorovodikovi kislini (ne več kot 1%), ekstraktivne snovi (ne manj kot 42%), listi rjavi in črni (ne več kot 5%), organske nečistoče (ne več kot 2%), mineralne nečistoče (ne več kot 0,5%).
Po rezultatih predhodne fitokemijske analize so v travi Siversa in P. našli eterično olje, flavonoide, tanine, hidroksicinamične kisline, kumarine, maščobne kisline in seskviterpene laktone.
Zaloge Siversa in P. eno leto. V tabeli 2 so prikazani podatki o pridelkih, bioloških (BZ) in operativnih rezervah (EZ) Siversa, in letno, ki rastejo na različnih območjih Buryatije.
Zaloge surovin s. Sivers in str.
območje spravila (g / m2) skupaj E prerast, (ha) BS (kg) EZ (kg)
env Mesto Gusinoozersk 58.0 ± 4.1 0.8 530.0 398.4
env c. Ganzurino 33,8 ± 2,4 0,4 154,4 116,0
env c. Borati 220,6 ± 15,1 20,0 50160,0 41100,0
env s Tapharjem 500,0 ± 26,3 0,5 2763,0 2237,0
env c. Sotnikovo 240,2 ± 19,4 25,0 69750,0 52850,0
env Ulan-Ude 500,0 ± 32,5 0,5 2815,0 2175,0
Okrožje Kabansky 285.SH = 19,7 30,0 97320,0 73680,0
Tunkinski okrožje 70,0 ± 8,0 0,2 172,0 108,0
Pribaikalsky District 280,9 ± 25,3 1,0 3315,0 2297,0
Kurumkansky okrožje 370.6 ± 34.0 0.1 438.6 302.6
env c. Hurumsha 228.0 ± 10.8 0.6 1497.6 1238.4
env Prebivalstvo 500,0 ± 46,2 30,0 177720,0 122280,0
env c. Sotnikovo 39,0 ± 2,1 25,00 10800,0 8700,0
Okrožje Kabansky 400,0 ± 27,1 30,0 136260,0 103740,0
Produktivnost nadzemnega dela pelina Sivers in letne p. V preučevanih goščavah se giblje od 33,8 ± 2,4 do 500,0 ± 32,5 g / m2 in od 39 ± 2,1 do 500 ± 46,2 g / m2. Biološke in operativne rezerve nadzemnih delov raziskanih rastlin znašajo 154,4–973,0 kg in 116,0-73680,0 kg (pelin Sivers), 1.497,6177720,0 kg in 1238,4-122280,0 kg (letni pelin).
Kemijska študija zelišč P. Sivers in P. letnih Flavonoidov. Celotna kvantitativna vsebnost flavonoidov je bila določena s splošno sprejeto metodo spektrofotometrične določitve v travi sivra in P. enoletnic, v smislu luteolin-7-glukozida v različnih fazah razvoja rastlin (vegetacija, brstenje, cvetenje, plodnost). Najvišja vsebnost flavonoidov je bila ugotovljena v vzorcih Severs in enoletnih vzorcev, zbranih v fazi naraščanja - 0,68 in 0,66%, najnižja v surovinah, zbranih v fazi plodov - 0,31% in 0,38% (tabela 3).
Količinska vsebnost flavonoidov v smislu luteolin-7-glukozida v travi P. Sivers in v travi P. enoletno, odvisno od vegetacijske faze
faza razvoja rastlin, količina flavonoidov, v smislu luteolin-7-glukozida (%)
Polžni pelin Sivers letni
vegetacija 0,67 ± 0,02 0,64 ± 0,04
brstenje 0,68 ± 0,05 0,66 ± 0,03
cvetenje 0,48 ± 0,03 0,52 ± 0,02
pridelka 0,31 ± 0,01 0,35 ± 0,01
Z metodo HPLC-MS smo odkrili naslednje flavonoide: rutin, luteolin-7-glukozid, kryo-eriol, kvercetin v travi sivra in v travi starega enega leta (sl. 1).
Sl.1. Kromatogram flavonoidov in P. Sivers, P. eno leto.
Z zunanjo standardno metodo smo določili kvantitativno vsebnost rutina, kriseriola, kvercetina v travi in v travi enoletne starosti (tabela 4).
V obeh vrstah pelina je največja količina luteolin-7-glukozida 0,04–0,08% (Sivers) in 0,88–1,77% (n. Eno leto), kvercetin 0,001% (Sivers) in 0,0070,009% (n) eno leto).
Količinska vsebnost flavonoidov (HPLC-MS)
Kolekcija Flavonoid iz pelinov Sivers (%)
rutin kvercetin luteolin-7-glukozid
Okrožje Ivolginsky, okr. c. Taphar, 0,002 ± 0,0001 0,001 ± 0,0002 0,040 ± 0,003
Okrožje Ivolginsky, okr. sotnikovo 0,002 ± 0,0002 0,001 ± 0,0001 0,080 ± 0,005
FLY je star eno leto in okrožje Ivolginsky, okr. Sotnikovo 0,018 ± 0,001 0,007 ± 0,0003 0,880 ± 0,004
Okrožje Kabansky, okr. c. Žlica 0,012 ± 0,002 0,009 ± 0,0003 1,700 ± 0,005
Maščobne kisline. Vrelinski vzorci vsebujejo od 8 do 13 maščobnih kislin. Za obe vrsti sta skupna palmitinska (16: 0), linolna (18: 2p6), linolenska (18: ZpZ) kislina, v količini 56,87-82,67% (vseh maščobnih kislin) v Seversu, 58,36-67,19% v n eno leto (skupnih maščobnih kislin). Poleg teh kislin vsebuje tudi znatna količina 10-oktadekenske kisline (18: 1p8) od 3,64% do 11,65%. Tudi v vseh vzorcih so bile odkrite 10-metil-undekanoične (¡° 12: 0) in 12-metil-tetradekanske (in 15: 0) kisline, njihova vsebnost pa ne presega 1%. Kromatogrami so prikazani na sliki 2.
Sl. 2. Kromatogrami maščobnih kislin (a) p. Sivers in (b) str. Eno leto (I - (16: 0), 2 - (18: 2p6), 3 - (18: ЗПЗ), 4 - (18: 1p8) ).
Elementarna sestava. V travi p. Sivers, ki raste v različnih regijah Buryatije, je vsebnost kalcija 0,56 ± 0,02-0,89 ± 0,03%, magnezija - 0,12 ± 0,01-0,28 ± 0,01%. Najvišja vsebnost kalcija in magnezija je zabeležena v vzorcih, zbranih v okrožju Kurumkansky, pri čemer je najnižja vsebnost magnezija v surovinah iz okrožja Tunkinsky in kalcija v rastlinah, zbranih v okrožju Selenginsky. Železo najdemo predvsem v rastlinah iz Kurumkanske regije
(141,25 ± 12,13 mg / kg), manj - iz okrožja Selenginsky (141,25 ± 12,13 mg / kg).
Vsebnost cinka se giblje od 23,73 ± 1,56 do 59,8 ± 1,56 mg / kg - p. Sivers in od 55,32 ± 0,83 do 66,50 + 0,89 mg / kg je enoletna, kar je sprejemljivo za normalno delovanje biokemičnih procesov. Vsebnost bakra je 8,42 ± 0,45-24,30 ± 1,56 mg / kg -n. Sivers, 9,37 + 0,18-13,48 + 0,44 mg / kg - eno leto staro (zahtevana količina je od 5 do 30 mg / kg). Nikelj v travi Seabere vsebuje 0,40 ± 0,01 -2,06 ± 0,03 mg / kg, kar ustreza rastlinam, ki potrebujejo od 0,1 do 5 mg / kg. Vsebnost kobalta v rastlini ne sme presegati 1 mg / kg, svinec - 10 mg / kg, kadmij - 0,2 mg / kg, krom - 1,0 mg / kg (Kabata-Pendias, 1989; Kashin, 2009). V Siversi je vsebnost kobalta manjša od 0,3 mg / kg, svinca je 3,19 ± 0,11 mg / kg, v p. v vseh vzorcih. Tako je vsebnost makro- in mikrohranil v koncentracijah, ki so normalne in zadostne za pretok vitalnih funkcij za rastline.
Sivers pelin zeliščno eterično olje. Eterično olje iz rastlin smo izolirali s farmakopejsko metodo št. V razlicnih vzorcih pse Siversa je vsebnost etericnega olja v razponu od 0,1 do 1,9%. V eteričnih olj Sivers, ki rastejo v različnih delih Buryatia, je bilo identificiranih več kot 80 spojin.
Raziskali smo sestavo eteričnih olj, izoliranih iz trave pelina Sivers, ki raste v različnih delih Burjatske.
(Ivolginsky (1), Selenginski (2), Kurumkanski (3), Pribaikalski (4.9),
Tunkinsky (5), Zakamensky (8), Irkutska regija (otok Olkhon) (6) in Mongolija (7). Največji pridelek eteričnega olja je v pelinu Sivers, ki raste v Tunkinski in Kurumkanski regiji (0,4%). Najmanjša količina olja je bila izolirana iz rastlin, zbranih na ozemlju Zakamensky, Pribaikalsky regij in Mongolije (0,1%) (slika 3).
Proučevali smo dinamiko kopičenja eteričnega olja glede na fazo razvoja rastlin (sl. 4). Rezultati so pokazali, da se nafta v največji količini kopiči v fazi cvetenja (0,6%), v. T
Sl. 3. Donos eteričnega olja p. Sivers iz kraja rasti.
faze brstenja in pridelka se kopičijo enako količino eteričnega olja (približno 0,3%).
1 - 1,8-daneol I-terpineal-4 3-p-farmaken '1 ■ sishna-4,11-dnen
Sl. 5. Kromatogram eteričnega olja p.
Sl. 4. Donos eteričnega olja str.
Sivers na različnih fazah razvoja rastlin (v rastni sezoni, b - pupkovanje, c - cvetenje,
Vse sestavine eteričnega olja lahko razdelimo v dve skupini - konstantno, tj. Najdemo v olju v vseh fazah razvoja rastline in občasno (manjše). V vseh vzorcih eteričnega olja Siversa, ne glede na površino rastlin, 1,8-cineol (2,34–22,57%), terpineol-4 (0,964,70%), germakren E (8,66-12,36%), P-farnezen (0,64-5,17%), Selina-4,11-diena (0,97-4,66%), Neril-2-metilbutanoata (4,80-8,79%) in Chamazulena (0,60-25,36%) (sl. 5).
Eterična olja, izolirana iz rastlin, ki rastejo v stepskih predelih, v Pribaikalskem okrožju (25,36%), vsebujejo najmanjšo količino hamazulena, najmanjši pa v okrožju Zakamensky (0,60%).
V sestavi eteričnega olja, izoliranega iz rastlin v različnih fazah razvoja - vegetacije, brstenja, cvetenja in plodovk, smo identificirali 54 spojin. Konstantne komponente so 1,8-cineol, linalol, terpineol-4, a-terpineol, p-farnezen, selina-4,11-dien, chamazulen.
Vsebnost chamazulena se v vegetacijski fazi giblje od 0,20 do 24,69%, v fazi kopanja od 21,34 do 61,91%, v fazi cvetenja od 1,53 do 34,42%, v fazi pridelka od 10,87 do 20,64%. Sklop sporadično pojavljajočih se komponent je pomemben (do 40 spojin) hkrati nizek v njihovi kvantitativni vsebini, zato je težko ugotoviti odvisnost njihove sestave od faze razvoja rastlin.
Za oceno vpliva razvojne faze na sestavine olja je bil uporabljen CIM (sl. 6).
Sl. 6. GK-model, odvisno od sestave
eterično olje iz razvojne faze Sivers (I-vegetacija, 2-brstenje, 3-cvetenje, 4-plodov)
to je ena od analiz
večdimenzionalni podatki, ki omogočajo dodeljevanje skritih spremenljivk v velikih podatkovnih poljih in analiziranje odnosov,
obstoječega sistema. Cilj metode glavne komponente je nadomestiti prvotni opis vzorcev s p spremenljivkami za novo obliko, ki je predstavljena v prostoru glavnih komponent (Esbenson, 2010).
Na modelu GK je mogoče ločiti ločena območja med seboj ločena in ustrezati različnim fazam razvoja pelina Sivers, kar kaže, da se sestava olja v različnih fazah razvoja razlikuje po vsebnosti manjših spojin.
Tako v različnih fazah razvoja Siversa kvalitativna sestava eteričnega olja konstantno sovpada in se razlikuje po manjših sestavinah.
Študija o fazah razvoja rastlin je pokazala, da je največja količina šamazulena v eteričnem olju Seversa koncentrirana v fazah cvetenja in cvetenja, medtem ko je kopičenje olja v fazi cvetenja večje kot v fazi pupkovanja. Zato smo v teh fazah proučevali posebnosti kopičenja eteričnih olj v različnih delih rastline (sl. 7).
O fazi pupkovanja V fazi cvetenja
Sl. 7. Donos eteričnega olja v različnih delih Siversa.
ekstraktno eterično olje iz različnih delov rastlin v fazi cvetenja je pokazalo, da je za cvetove (košare) značilen najvišji pridelek, listi so manjši, stebla pa minimalna. V fazi
Pupljenje v travi P. Siversa je predvsem olje v popkih, nekoliko manj v listih in minimalno količino olja v steblih.
Analiza eteričnega olja iz različnih delov rastline je pokazala, da je sestava sestavine olja, pridobljenega iz socvetij in trave Siversa najbolj raznolika, več kot 70 komponent, nato pa več kot 40 komponent iz listov in manj kot vse spojine v olju, pridobljenem iz stebel, je približno 20 sestavnih delov. Stalne sestavine vzorcev eteričnega olja, ne glede na njihovo lokacijo, so 1,8-cineol, linalool, terpineol-4, germakren 13, a-terpineol, a-bisabolol in chamazulen (tabela 5).
Konstantne sestavine eteričnega olja Sivers Wormwood
vsebnost sestavin v% celotnega olja
faza cvetenja
socvetja listi stebli brsti listi stebla
1,8-cineol 8,00 6,39 6,04 1,94 + 23,41
linalool 5.93 1.38 0.65 + 3.83
terpineol-4 2,56 2,10 0,57 0,88 + 5,37
a-terpineol 2.39 2.10 0.82 1.44 + 4.66
Germakren E 7.20 7.81 1.96 11.18 7.81 10.57
a-bisabolol 2.28 1.25 1.66 5.24 10.93 5.86
Chamazulene 6.23 23.02 37.11 7.81 21.17 3.51
Analiza je pokazala, da na različnih področjih rasti, v različnih fazah razvoja in v različnih delih Seversa, kvalitativna sestava eteričnega olja konstantno sovpada in se razlikuje pri sporadično pojavljajočih se spojinah.
Eterično olje pelinske letne zelišča. Kot v prvem primeru smo izbor eteričnega olja izvedli s farmakopejsko metodo št. Kemična sestava letnih eteričnih olj je predstavljena s 40 komponentami. Stalne komponente so keton artemisije (10,24–14,62%), kariofilen (9,93–10,71%), germakren B (3,53–7,82%), p-selenen (21,75–29,46%), kariofilenski oksid (4,44–14,31%) (sl. 8).
V različnih fazah razvoja rastline se iz zelišča pelina pridobiva od 0,5 do 0,7% eteričnega olja. Največji izkoristek eteričnega olja v fazi cvetenja (0,7%) (sl. 9).
V vseh fazah razvoja rastlin so v eteričnem olju prisotni artemizijski keton, kariofilen (3-selen, kariofilen oksid), kvantitativna vsebina glavnih sestavin pa se spreminja v različnih fazah razvoja rastlin. in kariofilenov oksid - v fazi cvetenja.
3. Kromatogram eteričnega olja p.
Sl. 9. Donos eteričnega olja letno v različnih fazah razvoja rastlin (rastlinstvo, b-bud, c-cvetenje, p-plodnost).
Žleze eteričnih olj so neenakomerno porazdeljene v rastlini, zato se lahko iz različnih delov rastline razlikujejo eterična olja, ki se razlikujejo tako količinsko kot kakovostno.
Določene so posebnosti kopičenja eteričnih olj v fazi cvetenja v različnih delih letnega pelina (sl. 10).
Več kot 60 spojin je bilo najdenih v eteričnih oljih iz različnih delov rastline. Constant
sestavine za olja iz socvetja, listov, stebel so artemisia alkohol, p-kariofilen, oksid
Glavna sestavina letnega eteričnega olja je keton artemizija - v olju se ne nahaja iz stebel, čeprav je polovica olja iz socvetja (49,14%) in skoraj tretjina listov (29,76%).
Analiza eteričnih olj je pokazala, da je na različnih področjih rasti, v različnih fazah razvoja in v različnih delih n. Letne trave, kot tudi trava n. Sievers, kvalitativna sestava eteričnega olja enaka v konstantni in različni komponenti.
Razvoj metode za kvantitativno določanje artemizinina v pelinu z letno metodo HPLC-MS
Izbira pogojev za kvantitativno ekstrakcijo artemizinina iz letnega pelina. Razviti kvantitativno metodologijo
1 2 s sl. 10. Donos eteričnega olja v različnih delih letne (1-socvetje, 2-listi, 3-stebla).
Za določanje artemisinina v travi P. enoletnih ekstrakcijskih pogojev smo izbrali ekstrakcijo artemizinina do maksimalne vrednosti. Analizirali smo ekstrakte, pridobljene z metodami maceracije, ultrazvočne ekstrakcije in subkritične ekstrakcije CO2. Kot ekstrakte smo uporabili različna topila (tabela 6). Vsebnost artemizinina v ekstraktih, ločenih z ultrazvočno ekstrakcijo in maceracijo z različnimi topili, se bistveno ne razlikuje (0,038-0,040%). Največja količina artemizinina (0,054%) je vsebovana v ekstraktu, pridobljenem pri ekstrakciji s podkritičnim CO2.
Metode in parametri za ekstrakcijo izvlečkov iz trave pelina enoletni z različnimi metodami ekstrakcije ______
ekstrakcijski postopek ekstrakcijskega postopka ekstrakcijskega časa / parametri ekstrakcije vsebnost artemisinina v%, v smislu a.s.s.
etanol 24 ur / razmerje surovin: topilo (1: 5), T = 25 ° S 0,040 ± 0,002
Maceracija etanol 48 h / razmerje surovin: topilo (1: 5), T = 25 ° S 0,038 ± 0,002
Razmerje heksan 24 ur / vzorca: topilo (1: 5), T = 25 ° S 0,039 ± 0,002
etil acetat 15 min / razmerje surovin: topilo (1: 5), frekvenca sondiranja 50 kHz, T = 25 ° S 0,022 ± 0,001
etanol 5 min. / razmerje surovin: topilo (1: 5), zvočna frekvenca 50 KHz, T = 25 ° S 0,022 ± 0,001
Ultrazvočna ekstrakcija etanola 10 min. / Razmerje surovin: topilo (1: 5), zvočna frekvenca 50 KHz, T = 25 ° S 0,024 ± 0,001
etanol 15 minut / razmerje surovin: topilo (1: 5), zvočna frekvenca 50 KHz, T = 25C, C 0,039 ± 0,002
etanol 20 min / razmerje surovin: topilo (1: 5), zvočna frekvenca 50 kHz, T = 25 ° S 0,039 ± 0,002
CO2-ekstrakcija CO2 24 h.1 pretok 30 l / h, T = 20-22 ° C, P = 6.0-6.2MPa 0.054 ± 0.003
Od vseh predlaganih metod ekstrakcije je ultrazvočna ekstrakcija optimalna (etanolni ekstrakt), ker je ta metoda hitra (čas ekstrakcije 15 minut) in je na voljo z instrumentacijo.
Metoda kvantitativne določitve artemizinina.
Razvoj tehnike za kvantitativno določanje artemisinina v zelišču letne je bil izveden s HPLC-MS. Uporabili smo Agilent 1200 HPLC z MC - detektorjem ("ionska past") 6330, ionizacijsko metodo - elektrosprej. Eluiranje je bilo izvedeno v izokratnem načinu (50% (A): 50% (B)), sestava začetnega pufra (A) -vodne raztopine mravljične kisline (pH = 3) + 2 ml nasičene raztopine amonijevega acetata, elucijski pufer (B) - 100% acetonitril. Volumski pretok eluenta je 0,5 ml / min, volumen vbrizganega vzorca je -25 μl. Ioni so bili zabeleženi v načinu spremljanja pozitivno nabitih ionov (SRM) z maso 300 (zaradi dodajanja NrH4 iona molekuli artemisinina), širina okna (299301) m / z. Rezultati so bili potrjeni s tandemsko masno spektrometrijo, hčerinski ion (MS2) z maso 223 m / z je bil pridobljen iz matičnega iona (MS) z maso 300 m / z.
Sovpadanje retencijskih časov in masnih spektrov artemizinina, določenega v travi enoletne starosti z uporabo CO raztopine navedene spojine, nam omogoča, da ugotovimo, da je čista spojina identična čistemu artemisininu (sl. 11, 12).
Sl. 11. Kromatogram CO artemisinina in P. enoletnega ekstrakta.
iv ix язтжяауат ассс »
Sl.12. Masni spektri a) artemisinina, vsebovanega v n. Letni travi, b) artemizinina CO.
Za kromatografsko-masno spektrometrijo smo uporabili absolutno kalibracijsko metodo za kvantitativno analizo. Za določitev koeficienta umeritvene krivulje smo pripravili več (vsaj 20) kalibracijskih raztopin artemizinina. Priprava raztopin je bila izvedena takole: 5 x 10 "3 g artemizinina stehtamo, damo v 50 ml merilno bučko, dodamo 25 ml acetonitrila. Vsebina bučke
temeljito premešamo do popolnega raztapljanja, nato pa prostornino v bučki damo do oznake z destilirano vodo. Izvedli smo analizo pri različnem volumnu vbrizganega vzorca od 1 do 40 μl. Izmerili smo površino vrha v kromatogramih. Po pridobljenih podatkih je bila konstruirana kalibracijska krivulja (sl. 13). Vrednosti površine vrha so bile narisane na osi ordinate in ustrezne vrednosti vsebnosti artemisinina (g) so bile narisane na osi abscise.
Iz dobljenih podatkov je bil izračunan koeficient kalibracijske krivulje: k = Б / х, kjer je k koeficient umeritvene krivulje, 5 je površina vrha analizirane raztopine, h je vsebnost artemisinina (g)
Koeficient kalibracijske krivulje (k) je opredeljen kot aritmetično povprečje koeficientov k,.
Sl. 13. Diplomska tabela za določanje vsebnosti artemisinina.
Vsebnost artemisinina v enoletnem ekstraktu pelina je bila določena s formulo: C = 5 / c, pri čemer je 5 površina vrha artemizinina v analizirani raztopini in k je koeficient umeritvene krivulje. Meroslovni podatki o določanju koeficienta kalibracijske krivulje (k) so podani v tabeli 7. t
Metrološke značilnosti izračuna koeficienta umeritvene krivulje artemisinin
1 X Э2 Е Р ЮУ) Дх Е,%
19 1.32 * 10m 1.84 * O15 4.25 * 10 "95 2.09 1.28 * 10" 1.97 1.90 * 10 "
Rezultati kvantitativne določitve artemizinina v ekstraktu pelina so predstavljeni v preglednici 8. t
Rezultati kvantitativnega določanja artemisinina v ekstraktu pelina enoletna metoda HPLC-MS
Metrološke značilnosti (n = 5, P = 95%)
0,039 0,75 * 10 "0,27 * 10" 2 2,57 0,83 * 10 ° 1,21 0,12 * 10 "
Razvita metoda je določila kvantitativno vsebnost artemisinina v travi, ki je bila v fazi cvetenja enoletna (tabela 9). Tehnika je potrjena - specifičnost, natančnost potrjena.
Vsebina artemisinina v travi pelina letno
Področje Artemisinina in datum zbiranja (%)
Okrožje Ivolginsky, 10 km od Sotnikova, 08/12/2010 0.054 ± 0.003
Ivolginhiy rn, 10 km od Sotnikova, 22.08.2011 0,027 ^.001
Okrožje Ivolginsky, okr. c. Oriole, 19.08.2011 0,069 ± 0,004
Okrožje Kabansky, okr. c. Tarakanovka, 08.22.2011 0.023 ± 0.001
V vzorcih, zbranih v regiji Ivolginsky, v bližini Oriole vsebuje največjo količino artemizinina (0,069%), najmanjšo pa v vzorcih iz okrožja Kabansky, okr. c. Ščurka (0,023%). Ugotovljeno je bilo, da se največja količina rastlin artemisinina koncentrira v fazi cvetenja - 0,039%, najmanjša - v fazi vegetacije in brstenja - od 0,006 do 0,007%. Artemizinove socvetje vsebujejo - 0,029%, nekoliko manj - 0,021% v listih, najmanjša količina v steblih pa 0,007% (Tabela 10).
Vsebnost artemizinina v travi pelina letno, odvisno od vegetacijske faze, v različnih delih rastline
razvojne faze obrata
vegetacija brstenja cvetoče liste socvetje stebla
0,006 ± 0,0002 0,007 ± 0,0002 0,039 ± 0,003 0,021 ± 0,001 0,029 ± 0,002 0,007 ± 0,0002
Optimalni čas za zbiranje trave letnega pelina je torej faza cvetenja, zato je priporočljivo zbrati celoten zračni del.
Vsi doseženi rezultati so vključeni v projekte FS na travniku Siversovega pelina in zelišč letnega pelina.
1. Razkrite so glavne diagnostične značilnosti trave Sivers in P. enoletne trave, razvili so numerične kazalnike, potrebne za standardizacijo surovin. Opredeljene so zaloge Sivers in P., ki rastejo na različnih območjih Republike Burjatije.
2. Določili smo vsebnost flavonoidov, maščobnih kislin, makro- in mikrohranil v travi nukleotidov in travi n. Flavonoidi - luteolin-7-glukozid, rutin, quercetin in chryoeriol so bili odkriti s HPLC-MS metodo v teh rastlinah. Glavne maščobne kisline v preučevanih vrstah pelina so palmitinska, linolna, linolenska, 10% oktadekenska kislina pa se nahaja tudi v pomembnem pelinu.
3. Ugotovljeno je bilo, da kakovostna sestava rastlinskih eteričnih olj ostaja nespremenjena ne glede na kraj rasti in fazo razvoja. Stalne komponente Sivers so 1,8-cineol, terpineol-4, D germacren, p-farnesen, Selina-4,11-dien, neyl-2-metilbutanoat in chamazulen, in Artemisia keton, karyofillen, germacrene eno leto D, p-selenen, kariofilni oksid. Nakup eteričnega olja v fazi cvetenja je večji (0,7%) kot v fazi pojava (0,3%). Največjo količino chamazulena p. Sivers se kopiči v fazah brstenja (do 62%) in cvetenja (do 34%).
4. Določeni so bili pogoji za ekstrakcijo artemisinina (vrsta ekstrakta, ekstrakcijska metoda, čas ekstrakcije) iz letnega zelišča in ugotovljeno je bilo, da je največja ekstrakcija artemizinina dosežena z ultrazvočno in nenaravno ekstrakcijo CO2. Razvili in ovrednotili smo metodo kvantitativnega določanja artemizinina z enoletno metodo HPLC-MS (relativna napaka določanja ± 1,21%). Ugotovljeno je bilo, da se največja količina artemizinina v travi letne zelišča kopiči v fazi cvetenja v socvetjih (0,039%).
5. Razviti regulativni dokumenti za surovine - projekt FS „Paša za travnike Sivers“ in projekt FS „Trava pelina eno leto“.
Seznam objavljenih prispevkov na temo diplomskega dela
1. Zhigzhitzhapova, C.B. Kemična sestava eteričnega olja Artemisia gmelinii Web. et Stechm, ki izvira iz Srednje Azije / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva in rastlinska kemija.-2010.-№2. 131-133.
2. Zhigzhitzhapova, C.B. Kemijska sestava eteričnega olja pelinov Sivers Artemisia sieversiana Willd., Gojena v Burjatji / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Bilten državne univerze Buryat. Ser. Kemija-fizika. - 2009. -S. 3. - str.
3. Zhigzhitzhapova, C.B. Sestava eteričnega olja pelina Sivers Artemisia sieversiana Willd., Gojenega v Burjatji in v regiji Irkutsk / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva, V.V. Taraskin // Bilten Vzhodnosibirskega znanstvenega centra sibirske podružnice Ruske akademije medicinskih znanosti. - 2009. - №2 (66). -C. 103-105.
4. Zhigzhitzhapova, S.V. Sestava eteričnega olja Artemisia sieversiana Willd. v različnih fazah razvoja rastlin / S.V. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // Bilten Vzhodnosibirskega znanstvenega centra sibirske podružnice Ruske akademije medicinskih znanosti. - 2011. - №1 (77). 2. del - str.
5. Soktoeva, TE Sestava sestavine eteričnega olja Artemisia glauca Pall, ex Willd. flora Mongolije / T.E. Soktoeva, S.V. Zhigzhitzhapova, LD
Radnaeva, B.B. Taraskin // Bilten mladih znanstvenikov. - Tomsk, 2011. -Vyp. 2. - str.
6. Soktoeva, TE Kemična sestava eteričnega olja Artemisia gmelinii Web. Et Stechm. / T.E. Soktoev // Lomonosov-2009: materiali XVI. conf. študenti, podiplomski študenti in mladi znanstveniki. - Moskva, 2009. - str.
7. Zhigzhitzhapova, C.B. Eterično olje pelina Gmelin flora Burjatija in Mongolija / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // “Novi dosežki v kemiji in kemijski tehnologiji rastlinskih surovin”: materiali IV All-Russia. znanstveno conf. - Barnaul, 2009. - str.
8. Soktoeva, T.E. Sestava eteričnega olja pelina Sivers Artemisia sieversiana Willd., Ki raste v Republiki Buryatia / T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // “Tehnologije in oprema kemijske, biotehnološke in prehrambene industrije”: materiali II Vseross. znanstveno konferenci študenti, podiplomski študenti in mladi znanstveniki. - Biysk, 2009. - str.
9. Pavlova E.T. Kromatografsko ločevanje in kvantitativno določanje sestavin zdravil s HPLC / TE Soktoeva, T.A. Kolodin // “Problemi trajnostnega razvoja regije”: gradivo 5. šole-seminar za mlade znanstvenike iz Rusije. - Ulan-Ude, 2009. - 222-223.
10. Zhigzhitzhapova, S.V. Primerjalna analiza kemičnih sestavin Artemisia L., ki rastejo v Srednji Aziji / S.V. Zhigzhitzhapova, T.E. Soktoeva, L.D. Radnaeva, O. Grahl-Nilsen // “Modemske metode analize podatkov” Sedmi zimski simpozij o kemometriji. - Sankt-Peterburg, 2010. - 82-83.
11. Soktoeva, T.E. Primerjalna analiza sestave eteričnih olj polinije rodu Artemisia L., gojenih v Srednji Aziji / TE t Soktoeva // "Okolju prijazne tehnologije in materiali, ki varčujejo z viri": materiali regije, mladinski znanstveniki. conf. iz intern. sodelovanja. - Ulan-Ude, 2010.-S. 109-110.
12. Zhigzhitzhapova, C.B. Eterična olja vrste Artemisia L. / C. B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // “Razvoj tradicionalne medicine v Rusiji: izkušnje, raziskave, perspektive”: materiali nauchn. conf. iz intern. sodelovanja. - Ulan-Ude, 2010. - str.
13. Soktoeva, T.E. Sestava eteričnega olja brata in sestre pelina Artemisia sieversiana Willd. / T.E. Soktoeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // “Aktualne študije Bajkalne Azije”: materiali Intern. znanstveno Conf, - Ulan-Ude, 2010. - 309-312.
14. Badmaeva, E.E. Sestava eteričnega olja Artemisia macrocephala Jacq. ex Bess, ki raste v Mongoliji / E.E. Badmaeva,
T.E. Soktoeva // “Ekologija Rusije in sosednjih ozemelj”: materiali XV. okoljski con. - Novosibirsk, 2010. - str.
15. Badmaeva, E.E. Sestava eteričnega olja Artemisia annua / EE. Badmaeva, T.E. Soktoyeva, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Okolju prijazne in varčne tehnologije": materiali Vseross. mladinske konference iz intern. sodelovanja. - Ulan-Ude, 2011. -C. 156-157.
16. Soktoeva, T.E. Ekstrakcija artemizinina iz pelina letno Artemisia annua L. / T.E. Soktoeva, G.L. Ryzhov, K.A. Dychko, V.V. Khasanov, C.B. Zhigzhitzhapova, LD Radnaeva // "Prioritete in značilnosti razvoja Bajkalskega prostora": materiali V. mednarodnega. znanstveno conf. - Ulan-Ude, 2011. - str.
17. Zhigzhitzhapova, C.B. Kemična sestava Artemisia annua L. / C.B. Zhigzhitzhapova, TE Soktoeva, LD Radnaeva // »Vegetacija Bajkalske regije in sosednjih ozemelj«: materiali iz Vserosa. znanstveno conf. - Ulan-Ude, 2011. - str.
Atomska absorpcijska spektrofotometrija AAS
A.S. popolnoma suhih surovin
Biološko aktivne snovi
Biološke rezerve GZ
BH papirna kromatografija
Svetovna zdravstvena organizacija Svetovne zdravstvene organizacije
HPLC-MS tekočinska masna kromatografija visoke ločljivosti
GF State Pharmacopoeia
ISC metoda glavnih komponent
Standardni vzorec CO
tankoplastno kromatografijo
Operativne rezerve EZ
SRM Izberite Spremljanje reakcije
Avtorica se iskreno zahvaljuje mentorju študija, dr. LD Radnaeva kot tudi doktorica, izredna profesorica, višja raziskovalka Baikalski inštitut za upravljanje z naravo Sibirske podružnice Ruske akademije znanosti Zhigzhitzhapova C.B., doktor kemije, častni profesor Tomska državna univerza Ryzhova G.L. za pomoč in podporo pri pripravi diplomske naloge.
Format je bil 60x84 1/16. Ofsetni papir. Prostornina 1,5peč. l Cirkulacija 100. Številka naročila 67.
Tiskano v tiskarni založbe BNTS SB RAS. 670047 Ulan-Ude, Sakhyanova, 6.
Vsebina teze Soktojeva, Tuyana Erdemovna :: 2011 :: Ulan-Ude
Poglavje 1. PREGLED KNJIŽEVNOSTI
Trenutno stanje raziskav o raziskavi rodu Artemisia L.
1.1. Botanične značilnosti pelina Sivers in 12. letnega pelina
1.2. Eterična olja in naravne rastline azulena iz rodu Wormwood
1.2.1. Kemična sestava eteričnih olj in naravnih azulena 14 rastlin rodu Wormwood
1.2.2. Uporaba eteričnih olj rastlin rodu Wormwood v medicini
1.2. Artemisinin: odkritje, struktura in sinteza, fizikalno-kemijske lastnosti, mehanizem delovanja antiplasmodija
1.3. Sestava maščobnih kislin rastlin rodu Wormwood
1.4. Fenolne spojine rastlin rodu Wormwood
1.5. Elementalna sestava rastlin rodu Wormwood 38 ZAKLJUČKI DO GLAVE
POGLAVJE 2. ZNAČILNOSTI PREDMETOV IN METOD 41 RAZISKAVE
2.1. Predmeti študija, vzorci surovin - trava Siverjev pelina in 41 zelišč pelina letno
2.2. Raziskovalne metode
2.2.1. Biološke raziskovalne metode
2.2.1.1. Anatomska in diagnostična študija
2.2.1.2. Raziskovanje virov
2.2.2. Metode za kvalitativno in kvantitativno določitev 43 biološko aktivnih snovi
2.2.3. Analiza trgovskega blaga: metode za vzpostavitev 50 kakovostnih surovin
2.2.4. Metode statistične obdelave. Metoda glavne sestavine.
POGLAVJE 3. FARMAKOGNOSTIČNA ANALIZA ZELIŠČNEGA HERBALISA 53 CIVERI
3.1. Mikroskopska analiza zeliščne plošče Sivers
3.2. Zaloge pivov Sibers
3.3. Študija glavnega brata brata in sester BAS pelina
3.3.1. Kvalitativna in kvantitativna vsebina sestavin 64 eterično olje pelina Sivers
3.3.1.1. Kemična sestava in dinamika kopičenja eteričnega olja in 64 hamazulen v travi pelina Sivers na različnih območjih Burjatije t
3.3.1.2. Posebnosti kopičenja eteričnega olja in chamazulena v travi s 65 Siversovim pelinom v različnih fazah razvoja rastlin t
3.3.1.3. Nakup manjših sestavin eteričnega olja trave 71 Sivers pelina
3.3.1.4. Značilnosti kopičenja eteričnega olja in chamazulena v travi 72 Sivers pelina iz različnih delov rastline
3.3.2. Kakovostna in kvantitativna vsebnost flavonoidov in taninov v travi pelina Sivers
3.3.3. Sestava maščobnih kislin v pelinu Sivers
3.3.4. Elementarna sestava pelina zelišč letno SKLEPI NA POGLAVJE. T
POGLAVJE 4. FARMAKOGNOSTIČNA ANALIZA ZELIŠČNIH ZELIŠČ 83 EKO LETO
4.1. Mikroskopska analiza letnega pelina
4.2. Zaloge pelina letno
4.3. Študija glavnega pelina BAS enoletnega letnika
4.3.1. Kakovostna in kvantitativna vsebina sestavin eteričnega olja v pelinu zelišč letno
4.3.1.1. Kemična sestava in dinamika kopičenja eteričnega olja v 92 travah enoletnega pelina iz različnih krajev rasti
4.3.1.2. Posebnosti kopičenja eteričnega olja v travi pelina ^ letno na različnih fazah razvoja in v različnih delih rastline
4.3.2. Kvalitativna in kvantitativna določitev flavonoidov trave 100 pelina letno
4.3.3. Sestava maščobnih kislin v pelinu zelišč letno ^ ® *
4.3.4. Elementarna sestava zeliščnega pelina letno
4.4. Razvoj metode za kvantitativno določanje artemizinina v 103 travi pelina z letno metodo HPLC-MS
4.4.1. Izbira pogojev za kvantitativno ekstrakcijo artemisinina iz 103 enoletnega pelina
4.4.2. Razvoj tehnike za kvantitativno določanje artemizinina 104 s HPLC-MS
4.4.3. Količinska vsebnost artemisinina v letnem pelinu iz različnih krajev rasti
4.4.4. Analiza kvantitativne vsebnosti artemisinina v travi na letni ravni v različnih fazah razvoja in v različnih delih rastline
POGLAVJE 5. NASTAVITEV KAZALNIKOV 111 DOBRA SUROVINA
5.1. Morfometrični kazalniki surovin
5.2. Standardizacija pelina bratov in sester za travo
5.2.1. Merchandising indikatorji trave pragovi pelina!
5.2.2. Standardizacija Sirovih pelodnih rastlin glede na vsebnost 115 hamazulenov v sestavi eteričnega olja
5.2.3. Ugotavljanje roka trajanja Siversove pelinove trave
5.3. Standardizacija letnega pelina zelišč ^ ^ ^
5.3.1. Blagovni kazalci trave sagebrush letno * '^
5.3.2. Standardizacija letnega pivskega zelišča na vsebnost artemisinina
5.3.3. Določitev roka uporabnosti letnega pelina
Predstavitev diplomske naloge na temo "Farmacevtska kemija, farmakognozija", Soktoeva, Tuyana Erdemovna, povzetek
Ustreznost teme. Rastline rodu Artemisia (pelin) so obetavni viri biološko aktivnih snovi, kot so pehtranov pelin Artemisia dracunculus L., pelin Artemisia absinthium L., pelin Artemisia vulgaris L., ki se pogosto uporablja v ljudski, tradicionalni medicini in živilski industriji. Letni pelin Artemisia annua L. je bil uspešno uveden v kulturo v številnih državah, leta 2001 pa ga je Svetovna zdravstvena organizacija priporočila kot glavni vir artemisinina, prvega zdravljenja malarije. Danes države, ki proizvajajo artemisinin, zagotavljajo približno četrtino svetovnih zdravstvenih potreb [1, 2]. Iz enoletne starosti je bilo izoliranih 137 biološko aktivnih spojin, med njimi 40 seskviterpenov, 10 triterpenov, 7 kumarinov, 46 flavonoidov, ki lahko služijo kot osnova za razvoj zdravil [3]. V osemdesetih letih 20. stoletja je skupina znanstvenikov [4] poskušala gojiti divji rastlinski del enoletne flore ZSSR v ULI (Moskva). Danes se večja dela na uvodu prvega letnika izvajajo na Tomski državni univerzi. V Buryatia n.
Skupaj z enoletno v Burjatijo, Sivers pelin Artemisia sieversiana Willd, je zelo razširjena, ki je tudi obetavna vrsta. V travi P. Sieversa vsebujejo flavonoide, eterično olje, kumarine [5-8]. Eterično olje Seabere je zanimivo kot vir Chamazulena, nestrupene spojine z protivnetnimi, baktericidnimi, regenerativnimi učinki [9, 10].
Doslej podrobna kemijska študija o pepelih in pelinah Siversa letne flore Buryatije ni bila izvedena kot obetavni vir biološko aktivnih snovi, zato je njihova študija nujna naloga.
Cilj: Farmakognostna študija Siversovega pelina Artemisia sieversiana Willd. in pelin letno Artemisia annua L. kot dragocen vir biološko aktivnih snovi.
Za dosego tega cilja je potrebno rešiti naslednje naloge:
1. Ugotovite anatomske in diagnostične značilnosti nadzemnega dela Sivers p in p Eno leto, določite blagovne kazalce surovin, ocenite rezerve in možnost pobiranja pete let in Sivers na ozemlju Republike Burjatije;
2. Preučiti kemično sestavo glavnih skupin biološko aktivnih snovi teh rastlin in določiti njihovo količinsko vsebino, določiti lokalizacijo eteričnih olj in artemizinina v posameznih delih rastlin, preučiti dinamiko njihovega kopičenja v razvojnih fazah in določiti optimalne pogoje zbiranja;
3. Razviti metodo za kvantitativno določanje artemizinina v nadzemnem delu enoletne starosti;
4. Določiti kazalnike kakovosti in standarde za vsebnost osnovnih biološko aktivnih snovi, razviti regulativno dokumentacijo za zdravilne surovine - travno pelino Sivers in travo enoletnega pelina.
Znanstvena novost. Ugotovljene so bile glavne diagnostične značilnosti trave Sivers in P. godišnje, razviti so bili numerični kazalniki, potrebni za standardizacijo surovin.
Izdelana je bila študija kemijske sestave trave Sivers in trave enoletne trave. Določili smo vsebnost eteričnih olj, flavonoidov, maščobnih kislin, makro- in mikroelementov. Flavonoidi - luteolin-7-glukozid, rutin, quercetin in chryoeriol so bili odkriti s HPLC-MS metodo v teh rastlinah. Glavne maščobne kisline v preučevanih vrstah pelina so palmitinska, linolna, linolenska, 10% oktadekenska kislina pa se nahaja tudi v pomembnem pelinu.
Določeni so bili pogoji za ekstrakcijo artemisinina (vrsta ekstrakta, ekstrakcijska metoda, čas ekstrakcije) iz letne zelišča in ugotovljeno je bilo, da se maksimalna ekstrakcija artemizinina doseže z ultrazvočno in subkritično ekstrakcijo s CO2. S HPLC-MS je bilo ugotovljeno, da je največja količina artemisinina v enoletni starosti vključena v cvetoče obdobje v socvetjih.
Študija dinamike kopičenja eteričnega olja, odvisno od faze razvoja in dela obrata. Največja količina eteričnega olja kamazulena p. Siversa se kopiči v fazah brstenja in cvetenja v socvetjih.
Vzpostavljeni kazalniki kakovosti BAS so vključeni v regulativne dokumente.
Praktični pomen. Rezerve in možni letni obseg nabave naselja Sivers in enoletno poravnavo na ozemlju Republike Burjatije (naselje Sivers - od 0,1 do 73,7 tone na leto in poravnava eno leto - od 1,2 do 122,3 tone na leto).
Razvita je bila tehnika za kvantitativno določanje artemizinina v p. Trava z letno HPLC-MS metodo. Pogoji za pripravo vzorcev surovin za analizo za kvantitativno določanje artemizinina so znanstveno utemeljeni.
Izvedena je bila standardizacija surovin, razvili so se projekti FS - „Sivers Wormwood Herbal“ in „Wormwood One-Grass“.
Stopnja izvajanja. Metodo pridobivanja podatkov o eteričnih oljih in mikroskopskih analizah smo preizkusili in vpeljali v vzgojno-izobraževalni proces Oddelka za farmacijo pri Zveznem državnem proračunskem izobraževalnem zavodu za visoko strokovno izobraževanje “Buryat State University” (Zakon o izvajanju št. 1 z dne 6. septembra 2011). Projekti FS na travi peščenega sivra in enoletnega pelina so pripravljeni na obravnavo.
Potrditev dela. Glavne določbe diplomskega dela so bile predstavljene in obravnavane na: znanstveno-praktični konferenci z mednarodno udeležbo »Razvoj tradicionalne medicine v Rusiji: izkušnje, raziskave, perspektive« (Ulan-Ude, 2010); 7. zimski simpozij o kemometriji "Sodobne metode analize podatkov" (Saint-Petersburg, 2010); mednarodna znanstvena konferenca ob 15. obletnici Buryatske državne univerze "Aktualne študije o Bajkalni Aziji" (Ulan-Ude, 2010); V mednarodna znanstveno-praktična konferenca "Prednostne naloge in značilnosti razvoja Bajkalske regije" (Ulan-Ude, 2011); X mednarodna znanstveno-praktična konferenca "Problemi botanike Južne Sibirije in Mongolije" (Barnaul, 2011); IV. All-Russian Conference "Novi napredek v kemiji in kemijski tehnologiji rastlinskih materialov" (Barnaul, 2009); XVI mednarodna konferenca študentov, podiplomcev in mladih znanstvenikov "Lomonosov-2009" (Moskva, 2009); XV Mednarodna študentska ekološka konferenca "Ekologija Rusije in sosednjih ozemelj" (Novosibirsk, 2010); II. Vse ruska znanstveno-praktična konferenca študentov, podiplomskih študentov in mladih znanstvenikov "Tehnologije in oprema kemijske, biotehnološke in prehrambene industrije" (Biysk, 2009); Vse ruska znanstveno-praktična konferenca "Rastlinstvo Bajkalske regije in sosednjih ozemelj" (Ulan-Ude, 2011); V Šolski seminar mladih znanstvenikov iz Rusije »Problemi trajnostnega razvoja regije« (Ulan-Ude, 2009); regionalna mladinska znanstveno-praktična konferenca z mednarodno udeležbo "Okolju prijazne tehnologije in materiali, ki varčujejo z viri" (Ulan-Ude, 2010).
Delo je potekalo v okviru raziskovalnih projektov: RFBR: št. 08-04-90202-Monga »Študija biogenetskih vzorcev biosinteze biološko aktivnih spojin endemičnih rastlin Srednje Azije« (2008–2009), št. 08-04-9803 7-rsibirya in
Kemijska sestava rastlin kot indikator stanja ekosistemov v Bajkalski regiji (2008-2010); interdisciplinarni integracijski projekt №93 "Razvoj raziskav na področju medicinske kemije in farmakologije kot znanstvene podlage za razvoj domačih zdravil"; skupni projekt z Akademijo znanosti Mongolije "Pridobivanje novih lipo-in nanosomalnih oblik zdravil z uporabo naravnih surovin"; RFBR: № 10-03-16001-mobzros »Mobilnost mladih znanstvenikov« (2010), №11-03-90705-mobst znanstveno delo (usposabljanje) mladih ruskih znanstvenikov v vodilnih znanstvenih organizacijah Ruske federacije 2011 (2011).
Publikacije. Po rezultatih je bilo objavljenih 17 znanstvenih člankov, od tega 3 v periodičnih publikacijah, ki jih priporoča Visoka atestna komisija Ministrstva za obrambo in znanost Ruske federacije.
Za obrambo so izločeni:
• rezultate študije anatomske strukture, staležev, meril avtentičnosti Sivra in P., ki rastejo v Burjatti;
• rezultati kemijske študije biološko aktivnih snovi in njihove sezonske dinamike kopičenja;
• rezultate študij o standardizaciji nadzemnega dela Siversa in str.